ہم نے پچھلے ہفتے سیلولوز ایسٹیٹ میمبرین الیکٹروفورسس استعمال کرنے کے بارے میں متعدد تحفظات کا اشتراک کیا تھا، اور ہم آج آپ کے حوالہ کے لیے اس موضوع کو یہاں ختم کریں گے۔
کا انتخاب بفر ارتکاز
سیلولوز ایسٹیٹ میمبرین الیکٹروفورسس میں استعمال ہونے والا بفر ارتکاز عام طور پر پیپر الیکٹروفورسس میں استعمال ہونے والے سے کم ہوتا ہے۔ عام طور پر استعمال ہونے والا پی ایچ 8.6Bآربیٹل بفر کا انتخاب عام طور پر 0.05 mol/L سے 0.09 mol/L کی حد میں ہوتا ہے۔ حراستی کا انتخاب کرتے وقت، ایک ابتدائی فیصلہ کیا جاتا ہے. مثال کے طور پر، اگر الیکٹروفورسس چیمبر میں الیکٹروڈز کے درمیان جھلی کی پٹی کی لمبائی 8-10 سینٹی میٹر ہے، تو جھلی کی لمبائی کے فی سنٹی میٹر کے لیے 25V کا وولٹیج درکار ہے، اور موجودہ شدت جھلی کی چوڑائی کے فی سنٹی میٹر 0.4-0.5 mA ہونی چاہیے۔ اگر یہ اقدار الیکٹروفورسس کے دوران حاصل نہیں ہوتی ہیں یا اس سے زیادہ نہیں ہوتی ہیں تو، بفر کی حراستی میں اضافہ یا پتلا ہونا چاہئے۔
ضرورت سے زیادہ کم بفر ارتکاز کے نتیجے میں بینڈوں کی تیز رفتار حرکت اور بینڈ کی چوڑائی میں اضافہ ہوگا۔ دوسری طرف، بہت زیادہ بفر ارتکاز بینڈ کی منتقلی کو سست کر دے گا، جس سے کچھ علیحدگی والے بینڈز کو الگ کرنا مشکل ہو جائے گا۔
واضح رہے کہ سیلولوز ایسٹیٹ میمبرین الیکٹروفورسس میں کرنٹ کا ایک اہم حصہ نمونے کے ذریعے چلایا جاتا ہے جس سے کافی مقدار میں حرارت پیدا ہوتی ہے۔ بعض اوقات، منتخب بفر حراستی کو مناسب سمجھا جا سکتا ہے۔ تاہم، ماحولیاتی درجہ حرارت میں اضافے یا زیادہ وولٹیج کے استعمال کے دوران، گرمی کی وجہ سے پانی کے بخارات کا اخراج تیز ہو سکتا ہے، جس کے نتیجے میں بفر کا بہت زیادہ ارتکاز ہوتا ہے اور یہاں تک کہ جھلی خشک ہو جاتی ہے۔
نمونہ والیوم
سیلولوز ایسٹیٹ میمبرین الیکٹروفورسس میں، نمونے کے حجم کی مقدار کا تعین مختلف عوامل سے کیا جاتا ہے، بشمول الیکٹروفورسس کے حالات، خود نمونے کی خصوصیات، داغ لگانے کے طریقے، اور پتہ لگانے کی تکنیک۔ ایک عام اصول کے طور پر، پتہ لگانے کا طریقہ جتنا زیادہ حساس ہوگا، نمونے کا حجم اتنا ہی کم ہوسکتا ہے، جو علیحدگی کے لیے فائدہ مند ہے۔ اگر نمونے کا حجم بہت زیادہ ہے تو، الیکٹروفوریٹک علیحدگی کے نمونے واضح نہیں ہوسکتے ہیں، اور داغ لگنا بھی وقت طلب ہوسکتا ہے۔ تاہم، ایلیوشن رنگین میٹرک کا پتہ لگانے کے طریقوں کا استعمال کرتے ہوئے الگ کیے ہوئے داغ والے بینڈوں کا مقداری تجزیہ کرتے وقت، نمونے کا حجم بہت چھوٹا نہیں ہونا چاہیے، کیونکہ اس کے نتیجے میں کچھ اجزاء کے لیے کم جاذبیت کی قدر ہو سکتی ہے، جس سے ان کے مواد کا حساب لگانے میں زیادہ غلطیاں پیدا ہوتی ہیں۔ اس طرح کے معاملات میں، نمونہ کی مقدار کو مناسب طریقے سے بڑھایا جانا چاہئے.
عام طور پر، نمونے کی درخواست لائن کے ہر سینٹی میٹر پر شامل کردہ نمونے کا حجم 0.1 سے 5 μL تک ہوتا ہے، جو کہ 5 سے 1000 μg کے نمونے کی مقدار کے برابر ہوتا ہے۔ مثال کے طور پر، معمول کے سیرم پروٹین الیکٹروفورسس تجزیہ میں، ایپلی کیشن لائن کے ہر سینٹی میٹر پر شامل کردہ نمونے کا حجم عام طور پر 1 μL سے زیادہ نہیں ہوتا، جو 60 سے 80 μg پروٹین کے برابر ہوتا ہے۔ تاہم، اسی الیکٹروفورسس طریقہ کار کا استعمال کرتے ہوئے لیپوپروٹینز یا گلائکوپروٹینز کا تجزیہ کرتے وقت، نمونے کے حجم کو اسی طرح بڑھانے کی ضرورت ہے۔
آخر میں، ابتدائی تجربات کی ایک سیریز کے ذریعے مخصوص حالات کی بنیاد پر سب سے موزوں نمونے کا حجم منتخب کیا جانا چاہیے۔
داغدار حل کا انتخاب
سیلولوز ایسٹیٹ میمبرین الیکٹروفورسس میں الگ کیے گئے بینڈ عام طور پر پتہ لگانے سے پہلے داغدار ہوتے ہیں۔ مختلف نمونوں کے اجزاء کو داغ لگانے کے مختلف طریقوں کی ضرورت ہوتی ہے، اور سیلولوز ایسیٹیٹ میمبرین الیکٹروفورسس کے لیے موزوں داغدار طریقے فلٹر پیپر پر مکمل طور پر لاگو نہیں ہوسکتے ہیں۔
سٹیننگ حل کا انتخاب کرنے کے لیے تین اہم اصول ہیں۔سیلولوز ایسیٹیٹ جھلی. سب سے پہلے،پانی میں گھلنشیل رنگوں کو الکحل میں گھلنشیل رنگوں پر ترجیح دی جانی چاہئے تاکہ جھلی کے سکڑنے اور بعد کے داغدار محلول کی وجہ سے ہونے والی خرابی سے بچا جا سکے۔ داغ لگنے کے بعد، جھلی کو پانی سے دھونا اور داغ لگنے کی مدت کو کم کرنا ضروری ہے۔ دوسری صورت میں، جھلی گھماؤ یا سکڑ سکتی ہے، جو بعد میں پتہ لگانے پر اثر انداز ہو گی۔
دوم، نمونے کے لیے مضبوط داغ دار وابستگی کے ساتھ رنگوں کا انتخاب کرنا بہتر ہے۔ سیرم پروٹین کے سیلولوز ایسٹیٹ میمبرین الیکٹروفورسس میں، امینو بلیک 10B کو عام طور پر استعمال کیا جاتا ہے کیونکہ سیرم پروٹین کے مختلف اجزاء اور اس کے استحکام کے لیے اس کی مضبوط داغ والی وابستگی ہے۔
سوم، قابل اعتماد معیار کے رنگوں کا انتخاب کیا جانا چاہیے۔ کچھ رنگ، ایک ہی نام کے باوجود، نجاست پر مشتمل ہو سکتے ہیں جس کے نتیجے میں داغ پڑنے کے بعد خاص طور پر سیاہ پس منظر بن جاتا ہے۔ یہ اصل میں اچھی طرح سے الگ کیے گئے بینڈوں کو بھی دھندلا کر سکتا ہے، جس سے ان میں فرق کرنا مشکل ہو جاتا ہے۔
آخر میں، سٹیننگ حل حراستی کا انتخاب اہم ہے. نظریاتی طور پر، ایسا لگتا ہے کہ زیادہ داغدار حل کا ارتکاز نمونے کے اجزاء کی زیادہ مکمل داغدار اور بہتر داغدار نتائج کا باعث بنے گا۔ تاہم، یہ معاملہ نہیں ہے. نمونے کے اجزاء اور ڈائی کے درمیان بائنڈنگ وابستگی کی ایک خاص حد ہوتی ہے، جو داغدار محلول کی حراستی میں اضافے کے ساتھ نہیں بڑھتی ہے۔ اس کے برعکس، بہت زیادہ داغدار محلول کی حراستی نہ صرف رنگ کو ضائع کرتی ہے بلکہ واضح پس منظر حاصل کرنا بھی مشکل بنا دیتی ہے۔ مزید برآں، جب رنگ کی شدت ایک خاص زیادہ سے زیادہ قدر تک پہنچ جاتی ہے، تو رنگ کا جاذب وکر لکیری تعلق کی پیروی نہیں کرتا، خاص طور پر مقداری پیمائشوں میں۔ سیلولوز ایسٹیٹ میمبرین الیکٹروفورسس میں، داغ دار محلول کا ارتکاز عام طور پر کاغذ کے الیکٹروفورسس میں استعمال ہونے والے محلول سے کم ہوتا ہے۔
بیجنگ لیوئی بائیو ٹیکنالوجی کے بارے میں جاننے کے لیے تفصیلات's سیلولوز ایسیٹیٹ جھلیالیکٹروفورسس ٹینک اور اس کی الیکٹروفورسس ایپلی کیشن، براہ کرم یہاں ملاحظہ کریں:
lCellulose Acetate Membrane کے ذریعے سیرم پروٹین کو الگ کرنے کا تجربہ
lسیلولوز ایسیٹیٹ میمبرین الیکٹروفورسس
lCellulose Acetate Membrane Electrophoresis (1) کا استعمال کرتے وقت کئی باتوں کو ذہن میں رکھنا چاہیے۔
اگر آپ کے پاس ہماری مصنوعات کی خریداری کا کوئی منصوبہ ہے، تو براہ کرم ہم سے رابطہ کرنے میں سنکوچ نہ کریں۔ آپ ہمیں ای میل پر پیغام بھیج سکتے ہیں۔[ای میل محفوظ]یا[ای میل محفوظ]، یا براہ کرم ہمیں +86 15810650221 پر کال کریں یا Whatsapp +86 15810650221، یا Wechat: 15810650221 شامل کریں۔
حوالہ:الیکٹروفورسس (دوسرا ایڈیشن) بذریعہ مسٹر لی
پوسٹ ٹائم: جون 06-2023