اصول
سیلولوز ایسیٹیٹ فلم الیکٹروفورسس ایک الیکٹروفورسس طریقہ ہے جو سیلولوز ایسیٹیٹ فلم کو بطور سپورٹ استعمال کرتا ہے۔وہ رجحان جس میں چارج شدہ ذرات برقی میدان کے عمل کے تحت مخالف الیکٹروڈ کی طرف بڑھتے ہیں الیکٹروفورسس کہلاتے ہیں۔چونکہ ہر پروٹین کا ایک مخصوص آئسو الیکٹرک پوائنٹ ہوتا ہے، اگر ایک پروٹین کو اس محلول میں رکھا جاتا ہے جس کا pH اس کے آئیسو الیکٹرک پوائنٹ سے کم ہوتا ہے، تو پروٹین مثبت طور پر چارج ہو جائے گا اور منفی الیکٹروڈ کی طرف بڑھ جائے گا۔اس کے برعکس، یہ مثبت قطب کی طرف بڑھتا ہے۔چونکہ برقی میدان میں حرکت کرنے والے پروٹین مالیکیولز کی رفتار ان کے چارج، مالیکیولز کی شکل اور سائز سے متعلق ہے، مختلف پروٹینوں کو الیکٹروفورسس کے ذریعے الگ کیا جا سکتا ہے۔سیرم مختلف قسم کے پروٹین پر مشتمل ہوتا ہے، جن میں سے تمام کے پی ایچ 7.5 یا اس سے کم پر isoelectric پوائنٹ ہوتے ہیں۔جب سیرم کو الیکٹروفورسس کو چلانے کے لیے pH 8.6 بفر میں رکھا جاتا ہے، تو سیرم کے تمام پروٹین منفی طور پر چارج ہوتے ہیں اور برقی میدان میں مثبت پہلو کی طرف بڑھتے ہیں۔چونکہ مختلف سیرم پروٹینز کے ایک ہی pH پر مختلف چارجز ہوتے ہیں، اس لیے سالماتی ذرات سائز میں مختلف ہوتے ہیں، اور اس طرح نقل مکانی کی رفتار مختلف ہوتی ہے، اور وہ الیکٹروفورسس کے ذریعے الگ ہوتے ہیں۔سیرم پروٹین کے آئس الیکٹرک پوائنٹس اور مالیکیولر وزن نیچے دیے گئے جدول میں دکھائے گئے ہیں۔
| پروٹین | آئیسو الیکٹرک پوائنٹس (PI) | سالماتی وزن |
| البومین | 4.88 | 69000 |
| α1-گلولین | 5.00 | 200000 |
| α2-گلولین | 5.06 | 300 000 |
| β-گلولین | 5.12 | 9000~150000 |
| γ-گلولین | 6.85~7.50 | 156 000~ 300 000 |
یہ تجربہ خون کے سیرم میں مختلف پروٹینوں کو سیلولوز ایسٹیٹ میمبرین (abbr. CAM) کے ساتھ سپورٹ میڈیا کے طور پر الگ کرنا ہے۔CAM فومڈ لوز کی ایک قسم ہے۔eاچھی وردی کے ساتھ فلم، اور موٹائی 0.1mm-1.5mm ہے، جس میں پانی کا ایک خاص جذب ہوتا ہے۔
CAM الیکٹروفورسس کے لیے مواد، آلات اور ریجنٹس
نمونے:صحت مند انسانی خون سیرم
آلہ:بجلی کی فراہمی DYY-6C، الیکٹروفورسس ٹینک DYCP-38C، اعلی نمونہ لوڈنگ WD-9404
ری ایجنٹس
1) سیلولوز ایسیٹیٹ جھلی 7X9cm
2) پی ایچ 8.6 باربیٹول بفر محلول (آئنک طاقت 0.05-0.09، یہ 0.06 ٹائم ہے۔): 1,84 گرام ڈائیتھائل باربیٹورک ایسڈ لیں، اور پھر 1.03 گرام ڈائیتھائل سوڈیم پینٹو باربیٹل لیں، پگھلنے کے لیے گرم کرنے کے لیے کچھ آست پانی ڈالیں، اور بنائیں۔ 1000ml تک؛
3) داغ: Ponceau S 0.2g، Trichloroacetic 3g، 100ml آست پانی شامل کریں؛
4) TBS/T یا PBS/T: 45ml 95% ایتھنول، 5ml glacial acetic acid، 50ml ڈسٹل واٹر شامل کریں۔
5) صفائی کا حل: 70 ملی لیٹر اینہائیڈروس ایتھنول، 30 ملی لیٹر گلیشیل ایسٹک ایسڈ۔
میتھو کا تجربہ کریں۔d
1) جھلی تیار کریں: جھلی کو باربیٹول بفر محلول 30 منٹ-8 گھنٹے میں ڈبو دیں، اور اسے باہر نکالیں، جاذب کاغذ کے ذریعے اضافی محلول کو ہٹا دیں۔
2) نمونے لوڈ ہو رہے ہیں: جھلی کے کھردری طرف اور ہموار طرف میں فرق کریں، اور کھردری طرف کے اوپری سرے تک 1.5 سینٹی میٹر کے فاصلے پر ایک لکیر کو نشان زد کریں۔کسی نہ کسی طرف اعلی نمونہ لوڈنگ ٹول کے ذریعہ نمونے لوڈ کریں۔نوٹ: نمونے جھلی کے کھردرے حصے پر لوڈ کیے جائیں۔سیرم کے نمونے مکمل طور پر جھلی میں داخل ہونے کے بعد، جھلی کو پلٹائیں، کھردری طرف (نمونوں کے ساتھ) کا چہرہ ٹینک کی طرف نیچے رکھیں، اور نمونوں کے ساتھ اختتام منفی الیکٹروڈ میں رکھا جاتا ہے۔
3) الیکٹروفورسس: پاور سپلائی آن کریں، 0.4～0.6m A/cm جھلی، چلنے کا وقت 30-45 منٹ ہے۔الیکٹروفورسس چلانے کے بعد، بجلی بند کر دیں۔
4) داغ اور صاف کریں: ٹینک سے جھلی نکالیں اور ڈوبیں۔it 5 منٹ کے لیے ڈائی سلوشن میں ڈالیں، اور پھر اسے صفائی کے محلول میں 3-4 بار صاف کریں جب تک کہ پس منظر کا رنگ صاف نہ ہو۔سیرم پروٹین کو بینڈوں پر دکھایا جانا چاہئے، اور عام طور پر پانچ زون ہوتے ہیں، نشان زدہ لائن کے اوپری سرے، البومن، α1-گلولین، α2-گلولین، β-گلولین، γ-گلولین۔
5) تحفظ: خشک الیکٹروفوریسس ڈالیںبینڈصفائی کے محلول میں 10-15 منٹ تک رکھیں، اور پھر اسے نکال کر صاف شیشے پر چپکائیں، خشک ہونے کے بعد یہ شفاف فلم بن جائے گی۔بینڈ.
تجربہنتیجہ
سیرم کے نمونوں کی علیحدگی کا اثر اچھا ہے، اور بینڈ ٹیلنگ کا کوئی رجحان نہیں ہے۔ٹیسٹ کے طریقہ کار اور تجربہ کار کے طریقوں کی وجہ سے نتائج کی تکرار کی صلاحیت مختلف ہوتی ہے، اور دہرانے کی صلاحیت زیادہ ہے۔
نتیجہ
تیز رفتار طبی الیکٹروفورسس کا پتہ لگانے کا نظام (الیکٹروفورسس ٹینکDYCP-38C،بجلی کی فراہمیDYY-6C اور اعلی نمونہ لوڈنگ WD-9404) ہمارے ذریعہ تیار کیا گیا ہے۔کمپنی بیجنگ لیوئی بائیوٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈتجرباتی ضروریات کو پورا کرتا ہے،اورنتائج قابل تولید، سادہ اور تیز، کے لیے موزوں ہیں۔پڑھاناتحقیق.
بیجنگ لیوئیبائیوٹیکنالوجی کمپنی، لمیٹڈ لائف سائنس انڈسٹری کے لیے الیکٹروفوریسس مصنوعات تیار کرنے میں مہارت رکھتی ہے، جوچین میں 50 سال سے زیادہ کی تاریخ ہے اور کمپنی پوری دنیا میں مستحکم اور اعلیٰ معیار کی مصنوعات فراہم کر سکتی ہے۔ترقی کے سالوں کے ذریعے، یہ آپ کی پسند کے قابل ہے!
اب ہم شراکت داروں کی تلاش میں ہیں، OEM الیکٹروفورسس ٹینک اور تقسیم کار دونوں کا خیرمقدم کیا جاتا ہے۔
ہمارے بارے میں مزید معلومات کے لیے، براہ کرم ہم سے ای میل کے ذریعے رابطہ کریں۔[ای میل محفوظ]یا[ای میل محفوظ].
پوسٹ ٹائم: نومبر 14-2022