1. درجہ بندی
جیل الیکٹروفورسس کو عمودی اقسام میں تقسیم کیا گیا ہے (بشمول کالم جیل اور سلیب جیل) اور افقی اقسام (بنیادی طور پر سلیب جیل) (شکل 6-18)۔ عام طور پر، عمودی علیحدگی افقی سے قدرے بہتر ہوتی ہے، لیکن افقی جیل کی تیاری کے کم از کم چار فائدے ہوتے ہیں: پورے جیل کے نیچے سپورٹ ہوتا ہے، جس سے کم ارتکاز والے ایگروز کے استعمال کی اجازت ہوتی ہے۔ مختلف خصوصیات کی ایگروز جیل پلیٹیں تیار کرنا ممکن ہے۔ جیل کی تیاری اور نمونہ لوڈ کرنا زیادہ آسان ہے۔ الیکٹروفورسس چیمبر تعمیر کرنا آسان اور سرمایہ کاری مؤثر ہے۔ چونکہ افقی الیکٹروفورسس ایگروز جیل پلیٹ کے ساتھ مکمل طور پر الیکٹروفورسس بفر کی سطح سے تقریباً 1 ملی میٹر نیچے ڈوب جاتا ہے، اس لیے اسے ڈوبنے والا الیکٹروفورسس بھی کہا جاتا ہے۔
ایگروز جیل الیکٹروفورسس کے لیے الیکٹروفورسس ٹینک DYCP-31DN
2. بفر سسٹم
نیوکلک ایسڈ کی علیحدگی میں، زیادہ تر نظام مسلسل نظام کو اپناتے ہیں۔ عام طور پر استعمال ہونے والے الیکٹروفورسس بفرز میں TBE (0.08mol/L Tris·HCl, pH 8.5, 0.08mol/L بورک ایسڈ، 0.0024mol/L EDTA) بفر اور THE (0.04mol/L Tris·HCl, pH 7.8, 0.02mol/L) شامل ہیں۔ سوڈیم ایسیٹیٹ، 0.0018mol/L EDTA) بفر۔ یہ بفر عام طور پر 10x اسٹاک سلوشنز کے طور پر تیار کیے جاتے ہیں اور استعمال ہونے پر مطلوبہ ارتکاز کے لیے پتلا کیے جاتے ہیں۔ ایگروز جیل میں لکیری اور سرکلر ڈی این اے کی نقل مکانی کی شرح استعمال شدہ بفر کے ساتھ مختلف ہوتی ہے۔ بفر میں، لکیری ڈی این اے کی منتقلی کی شرح سرکلر ڈی این اے سے زیادہ ہے، جبکہ ٹی بی ای بفر میں، اس کے برعکس سچ ہے۔
3. Agarose جیل کی تیاری
(1) Horizontal Agarose Gel کی تیاری
(a) 1x الیکٹروفورسس بفر کا استعمال کرتے ہوئے ایگروز جیل کی مطلوبہ حراستی تیار کریں۔
(b) ایگرز کو مکمل تحلیل کرنے کے لیے گرم کریں یا تو ابلتے ہوئے پانی کے غسل میں، مقناطیسی محرک پر، یا مائکروویو میں۔ ایگرز محلول کو 55 ڈگری سینٹی گریڈ پر ٹھنڈا کریں اور 0.5 μg/ml کے حتمی ارتکاز میں ایتھیڈیم برومائیڈ (EB) ڈائی شامل کریں۔
(c) شیشے یا ایکریلک پلیٹوں کے کناروں کو تھوڑی مقدار میں ایگروز جیل کے ساتھ سیل کریں، کنگھی ڈالیں، اور کنگھی کے دانتوں کو پلیٹ کے اوپر تقریباً 0.5~1.0 ملی میٹر رکھیں۔
(d) پگھلے ہوئے ایگروز جیل کے محلول کو شیشے یا ایکریلک پلیٹ مولڈ میں لگاتار ڈالیں (موٹائی DNA نمونے کے حجم پر منحصر ہے)، ہوا کے بلبلوں کے داخل ہونے سے گریز کریں۔ اسے کمرے کے درجہ حرارت پر قدرتی طور پر مضبوط ہونے دیں۔
(e) مکمل مضبوطی کے بعد کنگھی کو احتیاط سے ہٹا دیں۔ جیل ٹینک میں الیکٹروفورسس بفر کی مناسب مقدار شامل کریں، اس بات کو یقینی بناتے ہوئے کہ جیل پلیٹ الیکٹروفورسس بفر کی سطح سے تقریباً 1 ملی میٹر نیچے ڈوبی ہوئی ہے۔
(2) Vertical Agarose Gel کی تیاری
(a) شیشے کی پلیٹوں سے چکنائی یا باقیات کو ایتھنول سے دھو کر ہٹا دیں۔
(b) اسپیسر پلیٹوں کو اگلے اور پچھلے ڈیموں کے درمیان رکھیں، اسپیسر پلیٹوں کے کناروں کو اگلے اور پچھلے ڈیموں کے ساتھ سیدھ میں رکھیں، اور انہیں کلیمپ سے محفوظ کریں۔
(c) جیل کاسٹنگ چیمبر کے نیچے 1 سینٹی میٹر اونچا ایگروز پلگ بنانے کے لیے اسپیسر پلیٹوں کے کناروں کے درمیان 1x بفر میں 2% ایگروز شامل کریں۔
(d) پگھلے ہوئے ایگروز جیل کو مطلوبہ ارتکاز پر، 1x بفر میں تیار کردہ جیل چیمبر میں اوپر سے 1 سینٹی میٹر تک ڈالیں۔
(e) کنگھی ڈالیں، کنگھی کے دانتوں کے نیچے ہوا کے بلبلوں کو پھنسنے سے گریز کریں۔ کبھی کبھی، ایگروز جیل کولنگ کے دوران کنگھی کے دانتوں پر جھریاں نمودار ہو سکتی ہیں۔ ایسی صورتوں میں، اسے مضبوط کرنے کے لیے سب سے اوپر کچھ پگھلا ہوا ایگروز ڈالیں۔
(f) کنگھی کو ہٹا دیں۔ لوڈنگ سلاٹ میں بفر کے رساو کو روکنے کے لیے، ایگروز جیل پلیٹ اور الیکٹروفورسس چیمبر کے درمیان کنکشن کو 2% ایگروز کے ساتھ سیل کریں اور بفر کی مطلوبہ مقدار شامل کریں۔
(جی) جیل چیمبر میں 1x الیکٹروفورسس بفر شامل کریں۔
(h) بفر کے نیچے ایگروز جیل پر ڈی این اے کے نمونے احتیاط سے لوڈ کریں۔
ایگرز جیل الیکٹروفورسس کے بارے میں بنیادی معلومات کے بارے میں مزید معلومات، ہم اگلے ہفتے شیئر کریں گے۔ کاش یہ معلومات آپ کے تجربے میں مددگار ثابت ہوں۔
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) نے ہماری اپنی پیشہ ور تکنیکی ٹیم اور R&D سنٹر کے ساتھ 50 سال سے زائد عرصے سے الیکٹروفورسس آلات کی تیاری میں مہارت حاصل کی ہے۔ ہمارے پاس ڈیزائن سے لے کر معائنہ تک قابل اعتماد اور مکمل پروڈکشن لائن، اور گودام کے ساتھ ساتھ مارکیٹنگ سپورٹ ہے۔ ہماری اہم مصنوعات الیکٹروفورسس سیل (ٹینک/چیمبر)، الیکٹروفورسس پاور سپلائی، بلیو ایل ای ڈی ٹرانسلومینیٹر، یووی ٹرانسیلومینیٹر، جیل امیج اینڈ اینالیسس سسٹم وغیرہ ہیں۔
اب ہم شراکت داروں کی تلاش میں ہیں، OEM الیکٹروفورسس ٹینک اور تقسیم کار دونوں کا خیرمقدم کیا جاتا ہے۔
اگر آپ کے پاس ہماری مصنوعات کی خریداری کا کوئی منصوبہ ہے، تو براہ کرم ہم سے رابطہ کرنے میں سنکوچ نہ کریں۔ آپ ہمیں ای میل پر پیغام بھیج سکتے ہیں۔[ای میل محفوظ]یا[ای میل محفوظ]، یا براہ کرم ہمیں +86 15810650221 پر کال کریں یا Whatsapp +86 15810650221، یا Wechat: 15810650221 شامل کریں۔
براہ کرم Whatsapp یا WeChat پر شامل کرنے کے لیے QR کوڈ اسکین کریں۔
پوسٹ ٹائم: دسمبر-07-2023